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PNA BIO INC致力于為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室提供的研究產(chǎn)品和服務(wù)。
PNA Bio提供PNA（Peptide Nucleic Acid）產(chǎn)品，包括定制寡核苷酸，F(xiàn)ISH探針，miRNA抑制劑，PNA鉗夾探針和Fmoc單體。HPLC純化后，它們與MS / MS數(shù)據(jù)一起提供> 95％的純度。PNA產(chǎn)品由Panagene制造。
PNA Bio還提供工程化核酸酶服務(wù)，包括CRISPR / Cas9核酸酶（RGEN）合成，驗(yàn)證和Cas9蛋白以及敲除和敲入細(xì)胞系服務(wù)。
Cas9蛋白與指導(dǎo)RNA復(fù)合，為CRISPR / Cas9技術(shù)提供了優(yōu)于質(zhì)粒或mRNA轉(zhuǎn)染的益處。大的好處是，您可以制備準(zhǔn)備在體內(nèi)工作的RNP復(fù)合物。Cas9蛋白壽命短（細(xì)胞半衰期約為24小時(shí)），因此可以大限度地減少脫靶效應(yīng)和鑲嵌現(xiàn)象。您還可以通過(guò)簡(jiǎn)單的切割試驗(yàn)輕松測(cè)試體外指導(dǎo)RNA的活性。此外，Cas9蛋白非常穩(wěn)定，與mRNA相比，活性確認(rèn)更容易。后，它在更廣泛的生物體中是活躍的，例如線蟲，昆蟲，植物和非典型的模型系統(tǒng)，因?yàn)樗恍枰D(zhuǎn)錄或翻譯。
由PNA Bio提供的Cas9蛋白與NLS綴合，并且它是注射/轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備形式。
Cy3-Cas9可以很容易地富集用CRISPR / Cas9復(fù)合物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
體外切割測(cè)定
將PCR產(chǎn)物與不同量的Cas9蛋白一起溫育并在凝膠上運(yùn)行。體外切割測(cè)定是檢查sgRNA活性的簡(jiǎn)單方法。
轉(zhuǎn)染RNP復(fù)合物
通過(guò)電穿孔（Neon）或脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺（LF2000）將sgRNA和不同量Cas9蛋白的RNP復(fù)合物轉(zhuǎn)染到NIH3T3細(xì)胞中。
注射RNP復(fù)合物
對(duì)于小鼠胚胎注射，將60ng / ul Cas9蛋白的RNP復(fù)合物和兩種sgRNA各15ng / ul注射到小鼠胚胎中。從幼仔準(zhǔn)備尾部DNA并進(jìn)行T7E1測(cè)定.Grey代表WT，綠色代表大的缺失（＃2,3,4,8），紅色代表小/ del（＃5,6,7），藍(lán)色代表純合子小/ in（＃9,10）。
Cas9蛋白
· 來(lái)自化膿性鏈球菌的 Cas9蛋白與NLS
· 注射，轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備好
· 通過(guò)體外切割測(cè)定，電穿孔（作為RNP復(fù)合物）和
每批次的小鼠胚胎注射驗(yàn)證活性
· 標(biāo)準(zhǔn)濃度（CP01，重組至1 mg / ml）：20 ug，50 ug或200 ug（50 ug x 4）
· 高濃度（CP02和CP03，重組至5 mg / ml）：250 ug（CP02）或1 mg（CP03,250 ug x 4）
· 包裝：CP01為20 ug或50 ug，CP02 / CP03為250 ug
· 建議使用CP01進(jìn)行顯微注射，建議使用CP02 / CP03進(jìn)行電穿孔
· 也可用：D10A Nickase（CN01）和D10A / H840A dCas9（CD01）蛋白
液體形式的Cas9蛋白
· 可用1 mg / ml或5 mg / ml
· CP04-100：1mg / ml（6μM），20μg×5管
· CP04-500：5mg / ml（30μM），100μg×5管
Nickase和dCas9蛋白
· D10A Cas9 Nickase蛋白與來(lái)自化膿性鏈球菌的 NLS （CN01和CN02）
· D10A / H840A Cas9裂解死蛋白與來(lái)自化膿性鏈球菌的 NLS （CD01和CD02）
· 以50μg大小提供，重構(gòu)為1mg / ml（CN01 / CD01）或250μg大小，重構(gòu)為5mg / ml（CN02 / CD02）。
Cy3-Cas9和Cy3-dCas9蛋白
· Cy3標(biāo)記Cas9蛋白與NLS（CP06），以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的分選和可視化
· 通過(guò)共聚焦顯微鏡檢測(cè)熒光
· 通過(guò)體外切割測(cè)定和細(xì)胞轉(zhuǎn)染確認(rèn)活性
· 可提供濃度為5 mg / ml的50 ug（CP06-50）或200 ug（CP06-200）
· 還可獲得Cy3標(biāo)記的dCas9蛋白（CD07）
通過(guò)電穿孔進(jìn)入細(xì)胞，然后進(jìn)行T7E1測(cè)定，證實(shí)Cy3-Cas9蛋白的活性。通過(guò)共聚焦顯微鏡確認(rèn)熒光。
產(chǎn)品 | 描述 | 可用尺寸 |
CP01 | 含有NLS的Cas9蛋白（注射準(zhǔn)備好）; | 20微克（120 pmol / 6 uM x 20 ul） |
CP02 | 含有NLS的Cas9蛋白（注射準(zhǔn)備好）; | 250微克（1530 pmol / 30 uM x 50 ul） |
CP03 | 含有NLS的Cas9蛋白（注射準(zhǔn)備好）; | 1毫克（250微克x 4） |
CP04-100 | 含有NLS的Cas9蛋白（注射準(zhǔn)備好）; | 100微克（20微克x 5） |
CP04-500 | 含有NLS的Cas9蛋白（注射準(zhǔn)備好）; | 500微克（100微克x 5） |
CN01切口 | 用NLS準(zhǔn)備Cas9 D10A Nickase蛋白質(zhì); 重組至1 mg / ml（6 uM） | 50微克 |
CN02切口 | 用NLS準(zhǔn)備Cas9 D10A Nickase蛋白質(zhì); 重組至5 mg / ml（30 uM） | 250微克 |
CD01 | 含有NLS的Cas9 D10A / H840A蛋白; | 50微克 |
CD02 | 含有NLS的Cas9 D10A / H840A蛋白; | 250微克 |
CP06 | Cy3標(biāo)記的Cas9蛋白與NLS; | 50微克 |
CD07 | Cy3標(biāo)記的Cas9死蛋白與NLS; | 50微克 |
Pnabio 部分產(chǎn)品列表
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
CP01-20 | Reconstitutes to 1 mg/ml, 120 pmol (6 uM x 20 ul) | 20 ug | pnabio |
CP01-50 | Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul) | 50 ug | pnabio |
CP01-200 | Reconstitutes to 1 mg/ml, 1200 pmol (6 uM x 200 ul) | 200 ug (50 ug x 4) | pnabio |
CP02 | Reconstitutes to 5 mg/ml, 1530 pmol (30 uM x 50 ul) | 250 ug | pnabio |
CP03 | Reconstitutes to 5 mg/ml, 6000 pmol (30 uM x 50 ul x 4 tubes) | 1 mg (250 ug x 4) | pnabio |
CP04-100 | Liquid form 1 mg/ml, 600 pmol (6 uM x 20 ul x 5 tubes) | 100 ug (20 ug x 5) | pnabio |
CP04-500 | Liquid form 5 mg/ml, 3000 pmol (30 uM x 20 ul x 5 tubes) | 500 ug (100 ug x 5) | pnabio |
CN01 | Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul) | 50 ug | pnabio |
CN02 | Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul) | 250 ug | pnabio |
CD01 | Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul) | 50 ug | pnabio |
CD02 | Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul) | 250 ug | pnabio |
F1001 | C-rich telomere probe, FAM labeled | 5 nmole | pnabio |
F1002 | C-rich telomere probe, Cy3 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1003 | C-rich telomere probe, Cy5 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1004 | C-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1005 | G-rich telomere probe, FAM labeled | 5 nmole | pnabio |
F1006 | G-rich telomere probe, Cy3 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1007 | G-rich telomere probe, Cy5 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1008 | G-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1009 | C-rich telomere probe, FITC labeled | 5 nmole | pnabio |
F1010 | G-rich telomere probe, FITC labeled | 5 nmole | pnabio |
F1013 | C-rich telomere probe, Alexa Fluor 647 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1014 | G-rich telomere probe, Alexa Fluor 647 labeled | 5 nmole | pnabio |
F1020 | TelC probe for arthropods, Alexa Fluor 488 labeled | 5 nmole | pnabio |
F2001 | C-rich telomere probe, Biotin labeled | 5 nmole | pnabio |
F3001 | Centromere probe, FAM labeled | 5 nmole | pnabio |
F3002 | Centromere probe, Cy3 labeled | 5 nmole | pnabio |
F3005 | Centromere probe, Cy5 labeled | 5 nmole | pnabio |
F3004 | Centromere probe, Alexa Fluor 488 labeled | 5 nmole | pnabio |
F3008 | Centromere probe, Biotin labeled | 5 nmole | pnabio |
F3003 | Centromere probe, Cy3 labeled | 5 nmole | pnabio |
F3006 | Centromere probe, FAM labeled | 5 nmole | pnabio |
F5001 | CAG repeats, Cy3 labeled | 5 nmole | pnabio |
G2001-3 | A set of 4 PNA oligos against human globin, | 3 nmole | pnabio |
G2001-10 | A set of 4 PNA oligos against human globin | 10 nmole | pnabio |
MP01-25 | ggcaagtgttcttcgga | 25 nmole | pnabio |
MP01-50 | ggcaagtgttcttcgga | 50 nmole | pnabio |
PP01-25 | ggctcaaccctggacag | 25 nmole | pnabio |
PP01-50 | ggctcaaccctggacag | 50 nmole | pnabio |
RV01 | Surrogate reporter vector with GFP for FACS | 5 ug | pnabio |
RV02 | Surrogate reporter vector with GFP and H2KK for MACS | 5 ug | pnabio |
RV03 | Surrogate reporter vector with GFP and Hygromycin-R | 5 ug | pnabio |
CV01 | Cas9 co-transfection vector (CMV promoter) | 5 ug | pnabio |
CV02 | Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (CMV promoter) | 5 ug | pnabio |
CV03 | Cas9, RFP, puromycin R expression vector (CMV promoter) | 5 ug | pnabio |
CV11 | Cas9 co-expression vector (EF1a promoter) | 5 ug | pnabio |
CV12 | Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (EF1a promoter) | 5 ug | pnabio |
CV13 | Cas9, RFP, and Puromycin R expression vector (EF1a promoter) | 5 ug | pnabio |
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