Celltechgen CTG-MGD4766說(shuō)明書

Detect Kit

· Model: CTG-MGD4766

細(xì)節(jié)：

- 檢測(cè)套件

貨號(hào)：CTG-MGD4766

試劑盒組分：

2毫升單克隆抗體 - ，R-PE共軛。

2毫升Anti-R-PE磁珠。

1 ml Bead釋放試劑和1 ml Stop Buffer（可選）

描述

該套件用于隔離和檢測(cè) - ？使用磁珠磁性標(biāo)記的細(xì)胞。首先，通過(guò)與R-PE和抗R-PE磁珠綴合的單克隆抗體標(biāo)記細(xì)胞，在磁柱上正選擇- ⁺細(xì)胞，收集用于進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)分析。珠子釋放試劑和終止緩沖劑可用于從磁珠中釋放具有抗體-R-PE的細(xì)胞。

目標(biāo)特征

符號(hào)： -

基因編號(hào)：729816

Uniprot條目：Q04683

蛋白質(zhì)名稱：CXC趨化因子受體5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體1同源物）（CD抗原CD185）       

生物：Mus musculus（Mouse）

目標(biāo)功能

容量        

1 X 10 ^9個(gè)細(xì)胞

公式  

所有組分均以含有穩(wěn)定劑和0.05％sodium azide的緩沖液供應(yīng)。

存儲(chǔ)和使用      

在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結(jié)。到期日期顯示在樣品瓶標(biāo)簽上。該產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于診斷程序。

一般議定書

開(kāi)發(fā)檢測(cè)試劑盒以用特異性抗原分離和檢測(cè)靶細(xì)胞。篩選程序通過(guò)用針對(duì)特異性抗原的單克隆抗體直接磁性標(biāo)記細(xì)胞，與R-PE和抗R-PE磁珠綴合，然后將標(biāo)記的細(xì)胞保留在磁柱上，并且靶細(xì)胞釋放并收集用于進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)分析。

1.樣品制備

· 當(dāng)使用抗凝外周血或血沉棕黃層時(shí)，應(yīng)通過(guò)密度梯度離心分離外周血單核細(xì)胞（PBMC）。

· 為了在密度梯度分離后除去血小板，將細(xì)胞沉淀重懸于緩沖液中，并在20℃下以200×g離心10-15分鐘。小心吸出上清液。重復(fù)洗滌步驟。

· 使用組織或裂解的血液時(shí)，使用標(biāo)準(zhǔn)方法制備單細(xì)胞懸液。

· 死細(xì)胞可以非特異性結(jié)合磁珠。為了去除死細(xì)胞，我們建議使用密度梯度離心或死細(xì)胞去除試劑盒。

· 保持細(xì)胞冷卻，并使用預(yù)先冷卻的溶液。

2.磁性標(biāo)簽

· 以下給出的磁性標(biāo)簽卷多可達(dá)10個(gè)？總細(xì)胞。工作時(shí)少于10？細(xì)胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細(xì)胞數(shù)時(shí)，相應(yīng)地?cái)U(kuò)大所有試劑體積和總體積。

· 應(yīng)滴定初級(jí)染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應(yīng)該增加陰性群體的熒光強(qiáng)度。

1）     計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。

2）     以300×g離心細(xì)胞懸浮液10分鐘。*吸出上清液。

3）     每10 ^7個(gè)總細(xì)胞在80μL緩沖液中重懸細(xì)胞沉淀。

4）     加入20μl初級(jí)PE-綴合的抗體并充分混合，在2-8℃黑暗中孵育10分鐘。

5）     每10小時(shí)加入1-2 mL緩沖液，清洗細(xì)胞以去除未結(jié)合的一抗。將細(xì)胞以300×g離心10分鐘。

6）     *吸出上清液，每10 ^7個(gè)總細(xì)胞將細(xì)胞重懸于80μL緩沖液中。

7）     每10加入20μL抗PE磁珠？總細(xì)胞。

9）充分混合，在2-8℃下孵育15分鐘。

10）每10升加入1-2 mL緩沖液洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞以300×g離心10分鐘，*吸出上清液。

11）重新懸掛10？細(xì)胞在500μL緩沖液中。注意：對(duì)于更高的單元格數(shù)，請(qǐng)相應(yīng)地?cái)U(kuò)大緩沖區(qū)容量。

12）繼續(xù)進(jìn)行磁力分離。

3.用于檢測(cè)的靶細(xì)胞的陽(yáng)性選擇

1）將色譜柱放在合適的分離器的磁場(chǎng)中。 

2）用適量緩沖液沖洗，準(zhǔn)備色譜柱。

3）將細(xì)胞懸浮液施加到柱上。

4）收集未標(biāo)記的細(xì)胞，用適量的緩沖液通過(guò)并洗滌柱子。執(zhí)行洗滌步驟三次。          

5）從分離器中取出色譜柱并將其放在合適的收集管上。

6）移取適量的緩沖液到柱上并釋放靶細(xì)胞用于進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)分析。

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