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zeptometrix 0801010說(shuō)明書

更新時(shí)間:2019-05-08      點(diǎn)擊次數(shù):2176

zeptometrix 0801010說(shuō)明書

Chicken IgY (IgG) ELISA

預(yù)期用途
雞IgY是鳥類中發(fā)現(xiàn)的IgG樣分子的名稱。免疫雞IgY(IgG)
ELISA是一種快速、簡(jiǎn)便的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),用于雞IgY的測(cè)定。
雞血清、蛋黃或白色、血漿、唾液、粘膜、雞細(xì)胞或其他生物細(xì)胞培養(yǎng)液
樣品。
免疫試驗(yàn)雞IgY(IgG)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)僅用于研究目的。
試驗(yàn)原理
用對(duì)雞IgY反應(yīng)的多克隆抗體包裹的微孔板孔形成了分析的捕獲階段。正常雞蛋黃抗體
樣品樣品連同提供的標(biāo)準(zhǔn)品用分析稀釋劑適當(dāng)稀釋,然后在
微孔板井。經(jīng)過(guò)一個(gè)洗滌步驟后,在井內(nèi)捕獲的雞IgY與檢測(cè)抗體(一種多克隆抗驚厥藥)一起孵育。
與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合的IgY。這種抗體只對(duì)免疫球蛋白的Fc部分起反應(yīng)。
允許特異性檢測(cè)免疫球蛋白的分子。在另一個(gè)洗滌步驟之后,顯色底物
加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB),藍(lán)色與已添加的雞IgY的量成比例。
與抗體涂層板結(jié)合。通過(guò)添加停止溶液來(lái)停止酶反應(yīng),從而產(chǎn)生顏色。
變?yōu)辄S色,可以在450納米分光光度計(jì)上測(cè)量。然后雞IgY的濃度是
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。

試劑
供應(yīng)材料:
微孔板(1 x 96孔):12 x 8孔條,涂有山羊抗雞IgY
雞IgY檢測(cè)抗體(12 ml):含有HRP結(jié)合山羊抗雞IgY(Fc片段特異性)
雞IgY標(biāo)準(zhǔn)品(7 ml):在分析稀釋劑中含有125 ng/ml雞IgY。
分析稀釋劑(100 ml):含有PBS、阻斷蛋白、Triton X-100®
以及2-氯乙酰胺作為防腐劑。
10x洗板緩沖液(125 ml):含PBS、Tween 20?
和2-氯乙酰胺作為防腐劑
基質(zhì)(12 ml):含有四甲基聯(lián)苯胺(TMB)
停止溶液(12毫升):專有配方
微孔板封口機(jī)(1 PK):每包10封
可密封塑料袋(1袋):用于存放未使用的微孔板條。
Triton X-100是陶氏化學(xué)公司的注冊(cè)商標(biāo)。
Tween 20是ICI Americas,Inc.的注冊(cè)商標(biāo)。

 

所需材料但不提供:
個(gè)人防護(hù)用品(一次性手套、實(shí)驗(yàn)室外套、安全眼鏡等)
蒸餾水或去離子水
汽缸和燒杯
準(zhǔn)備樣品和IGG標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的試管和試管架
經(jīng)驗(yàn)證的可調(diào)節(jié)微量移液管和,單通道和/或多通道
計(jì)時(shí)器
在18-25攝氏度下驗(yàn)證的培養(yǎng)箱或溫控室
吸水紙巾
經(jīng)驗(yàn)證的可在450nm處測(cè)量光密度的微型板閱讀器
自動(dòng)微孔板清洗機(jī)或手動(dòng)真空吸塵設(shè)備
繪圖紙或計(jì)算機(jī)繪圖軟件
存儲(chǔ)
在2-8°C下儲(chǔ)存所有試劑盒。不要冷凍。未使用過(guò)的微孔板條應(yīng)保存在密封袋中,并使用干燥劑
盡量減少受潮。所有儲(chǔ)存和正確處理的試劑至少在打印的有效期之前是穩(wěn)定的。
工具箱標(biāo)簽。
注意事項(xiàng)
在進(jìn)行分析之前,仔細(xì)閱讀所有說(shuō)明。
處理套件組件和試樣時(shí),應(yīng)采取通用預(yù)防措施。**
為避免交叉污染,對(duì)每個(gè)樣品使用單獨(dú)的移液管。
當(dāng)測(cè)試潛在感染性樣本時(shí),遵守所有適用的地方、州和聯(lián)邦法規(guī)
生物危險(xiǎn)品的處置。
停止溶液含有鹽酸,可能導(dǎo)致嚴(yán)重?zé)齻H绻佑|到眼睛或皮膚,請(qǐng)沖洗
立即用水并尋求醫(yī)療救助。穿防護(hù)服和護(hù)目鏡。
**MMWR,1988年6月24日,第37卷,第24號(hào),第377-382、387-388頁(yè)

試劑的制備
洗板緩沖器:
使用前,在蒸餾水或去離子水中稀釋10倍1:10的洗板緩沖液。*混合。準(zhǔn)備1X洗板緩沖液
可在2-8℃下儲(chǔ)存一周。如有以下情況,可訂購(gòu)額外的10x洗板緩沖液(ZMC目錄:0801060)
需要。

雞肉標(biāo)準(zhǔn)曲線:
雞IgY標(biāo)準(zhǔn)為125 ng/ml,應(yīng)在分析稀釋劑中稀釋,以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,如
如下表所示。

 

 

試樣稀釋:
雞血清或血漿估計(jì)有7毫克/毫升的IgY。蛋黃約有6~13mg/ml的IgY。因?yàn)?br />我們建議在試驗(yàn)稀釋液中制備1:2500~3000倍稀釋液進(jìn)行初步試驗(yàn)。為了減少稀釋誤差,
建議采用三個(gè)稀釋步驟。例如,三個(gè)1:65倍的串聯(lián)稀釋液,其中10μL添加到640μL的分析中。
稀釋劑,是一種方便的稀釋方案。其他樣本可能含有或多或少的IgY,需要稀釋。
適當(dāng)?shù)亍?0倍稀釋液通常足以避免可能的基質(zhì)干擾。
試驗(yàn)程序
使用前讓所有試劑達(dá)到室溫。如上所述制備試劑。將要使用的試管貼上標(biāo)簽
用于制備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。如果整個(gè)微孔板不用于測(cè)試,去除多余的
從板架上剝開并用干燥劑放入可密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下儲(chǔ)存。
步驟1:在其端部凸耳上標(biāo)記每個(gè)板條,以確保板條在
化驗(yàn)。
第2步:用移液管將200μl標(biāo)準(zhǔn)1-6移到重復(fù)的孔中。
第3步:用移液管將每個(gè)樣品200μl移到重復(fù)孔中。
第四步:用封板器蓋住微孔板,在室溫(18-25攝氏度)下培養(yǎng)30分鐘。
第5步:抽取每口井的內(nèi)容物,用1X洗板緩沖液清洗4次(見試劑制備)
第節(jié))。沖洗時(shí),用至少300μl的1X洗板緩沖液填充井內(nèi),然后抽吸。執(zhí)行4個(gè)加注/吸氣循環(huán)。
在后一次清洗循環(huán)后,小心地敲擊吸水紙巾墊,*吸干盤子。繼續(xù)
敲擊直到?jīng)]有觀察到明顯的洗板緩沖液滴。
步驟6:用移液管將100μL雞IgY檢測(cè)抗體移到每個(gè)孔中。
第7步:用封板器蓋上封板,在室溫(18-25攝氏度)下培養(yǎng)30分鐘。

步驟8:如步驟5所述,用1X版洗滌緩沖液洗滌4次。
步驟9:將吸液管100 L的基片注入每個(gè)孔中。
步驟10:在室溫(18-25攝氏度)下培養(yǎng)皿30分鐘,不帶蓋子。藍(lán)色會(huì)在
水井里裝著雞。
步驟11:用移液管將100μL的停止溶液移到每個(gè)孔中。顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。輕敲微孔板至
混合。
第12步:在15分鐘內(nèi),用微型板閱讀器讀取450納米處每個(gè)孔的光密度。
預(yù)期結(jié)果
下面是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的示例,不應(yīng)用于計(jì)算實(shí)際樣本。可以觀察到變化
由于移液管、培養(yǎng)箱溫度、讀板器等原因,從實(shí)驗(yàn)室到實(shí)驗(yàn)室。

 

 

計(jì)算結(jié)果
測(cè)試有效性:
?0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)的平均光密度必須低于0.200。
125 ng/ml的平均光密度必須高于1.000。
當(dāng)平均光學(xué)濃度為
密度值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)。
計(jì)算:
1。計(jì)算每組標(biāo)準(zhǔn)和稀釋樣品的平均光密度(OD)值。
2。使用線性圖紙或繪圖軟件,在Y軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均OD值與
X軸上相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度。
三。通過(guò)這些點(diǎn)繪制適合擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。一個(gè)點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的結(jié)構(gòu)將是
準(zhǔn)確。
4。用標(biāo)準(zhǔn)曲線插值法測(cè)定各稀釋樣品的IgY濃度。
5。乘以用于稀釋每個(gè)樣品的稀釋系數(shù),以確定原始樣品的IgY濃度。
樣本。
性能特點(diǎn)
特異性:
免疫電泳和/或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)表明,該試劑盒中的雞IgY檢測(cè)抗體僅與Fc反應(yīng)。
雞免疫球蛋白重鏈的一部分,但不含雞免疫球蛋白的Fab部分。對(duì)其他非免疫球蛋白無(wú)反應(yīng)
檢測(cè)血清蛋白。
羊、兔、大鼠、驢、山羊、馬、牛、鼠和人血清均與ELISA反應(yīng)無(wú)反應(yīng)。
精度:

 

 

 

 

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