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PureBind 血液基因組 DNA 分離試劑盒說明書

更新時間:2021-05-31      點擊次數:1998

 

 

oceannanotech PureBind 血液基因組 DNA 分離試劑盒說明書

PureBind Blood gDNA Isolation Kit 專門設計用于從全血中以高產量和純度分離基因組 DNA。特殊包被的磁珠可實現高 DNA 結合能力并將來自各種樣品的污染降至該試劑盒具有適用于不同檢測形式(試管、96 孔形式、自動化)以及各種血樣體積(10 μL-10 mL)的靈活性。從全血中獲得的 DNA 純度高(A260/280 ≥ 1.8,A260/230 ≥ 1.4),適用于各種下游應用。該套件與各種商業血液穩定劑管和抗凝劑兼容。

 

oceannanotech B0711

 
 

高分子量基因組 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離出高分子量的高分子量基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。500 納克純化的 DNA 在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上與 GeneRuler™1kb Plus 階梯(Thermo Scientific)一起電泳;最上面的 DNA 梯帶是 20,000 bp。

來自全血的高純度基因組 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離的高純度基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。通過分光光度法分析洗脫的DNA以確定純度比和DNA濃度。

來自全血的無抑制劑基因組 DNA:分離的基因組 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共純化的抑制劑。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中詳述的,對 100 ng 洗脫的 DNA 進行了抑制 SPUD 擴增子擴增的能力分析。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

 

基因組靶標的成功qPCR擴增:對分離的基因組DNA的qPCR分析表明,基因組靶標的成功擴增和檢測。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 ABI TaqMan™ β-肌動蛋白 qPCR 測定法測定標稱 20 ng 洗脫的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。標準曲線跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 個基因組當量)的人類 DNA。測定效率計算為 102%。

分離的基因組 DNA 的酶促修飾:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。1 µg 純化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分鐘。此后限制性產物在1%瓊脂糖凝膠/TAE上電泳1小時。

 

從分離的基因組和線粒體 DNA 進行長距離 PCR 使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行長距離 PCR。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖腦苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 線粒體 NADH-泛醌氧化還原酶鏈 1 (MT-ND1) 片段的引物,通過 PCR 擴增 20 ng 純化 DNA。 PCR 產物在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上電泳 1 小時。這些高分子量目標的成功 PCR 擴增突出了分離 DNA 的結構完整性和我們的試劑盒分離線粒體 DNA 的能力。

與商業血液穩定劑管的兼容性: 血液基因組 DNA 試劑盒可用于從商業血液穩定劑管中分離不含抑制劑的 gDNA。將捐獻者血液抽取到 3 種市售血液穩定產品中,并在室溫下儲存 4 天。使用標準方案通過 Ocean NanoTech 試劑盒處理來自試管的 350 µL 等分試樣。作為穩定過程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也沒有使用 Ocean NanoTech 裂解緩沖液進行處理,因為 DNA/RNA Shield™ 裂解細胞。如分析生物化學,2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中詳述的,測定了從每次分離中洗脫的 100 ng DNA 抑制 SPUD 擴增子擴增的能力。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

性能與其他商用產品的對比: Ocean NanoTech的Blood gDNA試劑盒大大優于其他基于磁珠的血液gDNA分離試劑盒。來自同一供體的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用試劑盒所需的輸入血量通過每個試劑盒處理。分離的 DNA 以 100 µL 洗脫,并通過 NanoDrop 分析和 Qubit 分析評估純度。計算每個試劑盒的總產量(基于 Qubit 測量)和作為血液輸入量函數的產量。所有值均來自三個生物學重復。

 

    特征:
    • 無RNA污染。
    • 來自全血的高分子量 gDNA,不需要 RBC 和 WBC 的差異裂解。
    • 分離 > 9 微克 DNA/350μL 輸入血樣。
    • 與商業穩定劑管(例如 PAXgene Blood DNA 管、BioMatrica DNAgard Blood)兼容。
    • 自動化友好的 KingFisher(Duo、Duo Primer 和 Flex)腳本可用。
目錄#產品單元尺寸單價
B0711-096PureBind血液基因組DNA分離試劑盒1微米199.00 美元
B0711-384PureBind血液基因組DNA分離試劑盒10納米$ 677.00
產品描述PureBind血液基因組DNA分離試劑盒
應用從全血中分離核酸

 

 

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