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clsgmbh不培養(yǎng)的支原體檢測(cè)說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2022-06-29      點(diǎn)擊次數(shù):1641

 

clsgmbh不培養(yǎng)的支原體檢測(cè)說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品概述

細(xì)胞系、細(xì)胞組分、生長(zhǎng)和冷凍培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等等。

 

Mycoplasma testing without c*tion

 

 

產(chǎn)品編號(hào) 選項(xiàng)
900159 不培養(yǎng)的支原體檢測(cè)
900159.1 培養(yǎng)14天的支原體檢測(cè)

 

 

產(chǎn)品信息“無(wú)需培養(yǎng)的支原體檢測(cè)”

支原體是小的原核生物,它們太小而無(wú)法在顯微鏡下看到,并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會(huì)影響細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和形態(tài),從而可能導(dǎo)致不可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。大約 15% 到 35% 的實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染。因此,建議經(jīng)常控制以保證無(wú)支原體的環(huán)境。 

分析方法

CLS 提供支原體檢測(cè)的短期和長(zhǎng)期測(cè)試。在前者中,樣品在到達(dá)后立即進(jìn)行測(cè)試,而在后者中,開(kāi)始細(xì)胞培養(yǎng)并在無(wú)抗生素培養(yǎng) 14 天后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。支原體檢測(cè)是使用兩點(diǎn)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行的,該系統(tǒng)包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測(cè)試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測(cè)試劑盒 (Certus)。

比色報(bào)告基因測(cè)定

該測(cè)試是基于細(xì)胞的比色測(cè)定。在支原體存在的情況下,報(bào)告細(xì)胞系會(huì)誘導(dǎo)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng),從而觸發(fā)培養(yǎng)基中的顏色從紅色變?yōu)樗{(lán)色。該測(cè)定在 96 孔多孔板中進(jìn)行。在微孔板分光光度計(jì)中檢測(cè) 620-655 nm 的信號(hào)。檢測(cè)到所有支原體和膽原體物種,以及細(xì)胞培養(yǎng)物中的其他污染物,例如細(xì)菌。結(jié)果顯示在下面的條形圖中:

 

 

等溫?cái)U(kuò)增

等溫?cái)U(kuò)增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫?cái)U(kuò)增與使用 DNA 嵌入染料的實(shí)時(shí)檢測(cè)相結(jié)合的快速且可靠的測(cè)試。該測(cè)定法可以檢測(cè)出占污染 >95% 的六種常見(jiàn)的物種:口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發(fā)酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性,還將檢測(cè)到其他支原體物種(肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體)。為了確定樣品是支原體陽(yáng)性還是陰性,需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結(jié)果如下所示: 

 

 

出色地

顏色

樣品名稱

溫度 (°C)

結(jié)果

1

紫色的

樣本

94,65

消極的

2

 粉色的 

陽(yáng)性對(duì)照

87,37

積極的

3

 綠松石

陰性對(duì)照

94,16

消極的

等溫?cái)U(kuò)增結(jié)果的評(píng)估

所有熔化溫度及其各自的測(cè)試結(jié)果解釋如下:

樣本

以°C為單位的熔化溫度(Tm)

負(fù)控(NC)/內(nèi)控(IC)

94.8 +/- 0.2

陽(yáng)性對(duì)照 (PC)

87.9 +/- 0.2 

支原體陽(yáng)性

- 支原體DNA擴(kuò)增

87.0 - 89.2

支原體陽(yáng)性

- 被少量支原體污染;支原體 DNA 的擴(kuò)增和內(nèi)部對(duì)照 

87.0 - 89.2 和 

95.0 +/- 0.2

支原體陰性

- 擴(kuò)大內(nèi)部控制

95.0 +/- 0.2

被其他細(xì)菌污染或非特異性 
 擴(kuò)增

           89.5 - 94.0

 

比色報(bào)告分析結(jié)果的評(píng)估

如果測(cè)試呈陽(yáng)性,則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內(nèi)的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類的 CFU/ml 詳細(xì)列表如下所示:

 支原體種類

靈敏度 CFU (ml)

A.laylawii

2.5*10 3

M. arginini 

2.0*10 3

發(fā)酵菌 

5.0*10 2

M. hyorhinis

7.0*10 2

 口腔 桿菌

5.0*10 5

 

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