激情四月I麻豆亚洲I人人做I久草视频精品在线I九九少妇I午夜怡红院Iav女大全列表I夜夜夜夜爽I国产丝袜在线视频Iv片在线免费观看I亚洲欧美日韩一区I国产伦孑沙发午休精品I一级少妇毛片I亚洲一级黄色小说I免费日韩视频I免费在线观看一区I日韩欧美色图I亚洲欧美中出I免费视频91I亚洲激情二区

您好!歡迎訪問上海起發(fā)實驗試劑有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15921799099

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 (高通量)說明書

雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 (高通量)說明書

更新時間:2023-04-06      點擊次數(shù):2205

雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 (高通量)說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè),圓夢中國。

產(chǎn)品詳情

貨號

規(guī)格

價格

78EA10008-100T

100T

1,440.00

產(chǎn)品描述

報告基因檢測常用于研究真核生物基因表達調(diào)控,螢火蟲螢光素酶 和海腎螢光素酶可以分別催化底物螢光素(luciferin)和腔腸素(coelenterazine)發(fā)出生物螢光(bioluminescence),這種發(fā)光反應(yīng)具有良好的光學(xué)特征和濃度線性范圍,同時檢測的靈敏度高,可達到 10-20mol。兩種催化反應(yīng)最適濃度不同,因此互不干擾, 配合使用形成一套高靈敏的雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng),其中海腎螢光素酶常作為內(nèi)參照。

螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為 61 kDa 的蛋白,在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,催化 luciferin 氧化成 oxyluciferin,在此過程中會發(fā)出波長約為 560 nm 的生物螢光。海腎螢光素酶是一種分子量約為 36 kDa 的蛋白,在氧氣存在的條件下,催化腔腸素(Coelenterazine)氧化成 coelenteramide,在此過程中會發(fā)出波長約為 480 nm 的生物螢光。在后加入海腎螢光素酶底物時,可有效淬滅螢火蟲熒光素酶催化 luciferin 的發(fā)光,而不干擾海腎螢光素酶的活性,從而實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀(luminometer))或多功能酶標(biāo)儀進行測定。通過螢光素酶與其底物催化發(fā)光的體系,可以高效、靈敏地檢測基因的表達。檢測原理如圖所示:

 

 image.png

 1.熒光素酶報告基因反應(yīng)原理圖

 

產(chǎn)品組成

試劑盒組分:

名稱

規(guī)格

保存條件

5x Universal lysis BufferULB

20 mL

-20℃

Fluc Buffer A

5 mL

-20℃

Fluc substrate

干粉

-20℃

Rluc Buffer B

干粉 5 mL

-20℃

50x Rluc substrate

100 μL

-20℃

運輸與保存

冰袋運輸,-20℃保存 個月,-80℃保存更長時間。

實驗步驟

1. 試劑準(zhǔn)備:

11x Universal lysis BufferULB)配置:取所需體積的 5x Universal lysis Buffer 臨用前用三蒸水稀釋至1x

2)Fluc buffer A 工作液:試劑盒開始啟用時,將 Fluc buffer A 全部加入到 Fluc substrate 中,適當(dāng)吹打搖勻至粉末充分溶解后,分裝到棕色管中-20℃保存?zhèn)溆茫?/span>

3)Rluc Buffer B 工作液:臨用前取 50x Rluc substrate  Rluc Buffer B 稀釋至 1x 用(按需配置),配置好的 Rluc Buffer B 工作液在 2-3 h 內(nèi)使用有效(試劑配置過程中注意避光)。

2. 細(xì)胞裂解:

1) 細(xì)胞裂解:取出孔板放置至恢復(fù)室溫,加入適量體積 1x ULB 振蕩器搖勻,室溫裂解 15min。細(xì)胞裂解液推薦使用量:

 

細(xì)胞培養(yǎng)板型號

96 孔板

24 孔板

12 孔板

孔板

1x Universal lysis BufferULB/

30 μL

60 μL

80 μL

120 μL

 

2) 熒光酶標(biāo)儀設(shè)定,正確開啟儀器,點擊檢測,選擇生物發(fā)光檢測功能,根據(jù)本批樣本的靈敏度選擇合適增益與積分時間,默認(rèn)為增益 135,積分時間 10 s

3. 檢測:

1)移液槍吹打混勻裂解液后,吸取 20 μL 到黑色孔板底部。樣品數(shù)量過多時候建議使用移液槍經(jīng)轉(zhuǎn)移和后續(xù)加液操作,若使用四周不透光的培養(yǎng)板可省略轉(zhuǎn)移操作

2)向每孔中加入 100 μL Fluc buffer A,輕柔快速吹打混勻三次后,室溫孵育反應(yīng) 5-10min 后,上機檢測記錄發(fā)光值(F 

  3)向每孔中加入 100 μL Rluc buffer B,輕柔快速吹打混勻三次后,室溫孵育反應(yīng) 5-10min 后,上機檢測記錄發(fā)光值(

為保證結(jié)果準(zhǔn)確性,在加入 Fluc buffer A Rluc buffer B 后,請在 1h 內(nèi)完成檢測

 

實驗案例分析

 96 孔板中接種適量細(xì)胞過夜至貼壁狀態(tài),第二天進行如下轉(zhuǎn)染:1.含有FXR 基因啟動子區(qū)的熒光素酶報告基因表達載體質(zhì)粒;2.含有 FXR 基因啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子 E2 功能的重組表達載體質(zhì)粒;3.海參熒光素酶重組表達載體質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染 6h 向每孔中加入不同單體藥物培養(yǎng) 48h,其中設(shè)置空白溶劑 DMSO 組。最后按試劑盒說明書操作裂解隨后進行熒光素酶報告基因活性檢測,結(jié)果如下(對應(yīng)孔中所標(biāo)白色字體數(shù)值為陽性激動劑的激動倍數(shù)

image.png

 3 . 59 種單體藥物對基因啟動子區(qū)熒光素酶報告基因激動倍數(shù)熱圖(A1:為空白溶劑對照組;A2-J6: 59

 FDA 上市藥物的實驗組)

經(jīng)過上述實驗的高通量篩選確定 F3 孔對應(yīng)單體藥物對FXR 啟動子區(qū)激動效果強,激動倍數(shù)為 45。同某進口P"品牌一同測定該藥物對FXR 基因的激動曲線,并計算 EC50,結(jié)果如下:

 image.png

 4.紅色:起發(fā)生物品牌測定 F3 單體藥物激動 FXR 基因啟動子區(qū)熒光素酶報告基因響應(yīng)曲線;黃色:進P"品牌測定F3 單體藥物激動 FXR 基因啟動子區(qū)熒光素酶報告基因響應(yīng)曲線(EC50

1. 數(shù)據(jù)分析:

1)實驗設(shè)計:根據(jù)實驗?zāi)康模拷M實驗均應(yīng)設(shè)置空白對照組,對照組和處理組。

a. 空白對照組

背景 F:未轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解液+ Fluc buffer A

背景 R:未轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解液+ Fluc buffer A + Rluc buffer B

注:空白對照組樣品量須與實驗樣品量相同,且與實驗樣品含有相同的培養(yǎng)基/血清組合。

b. 對照組:轉(zhuǎn)染細(xì)胞未經(jīng)實驗因素處理 (即對照組 F 和對照組 R)

c. 實驗組:轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實驗化合物處理 (即實驗組F 和實驗組 R)

計算結(jié)果:對照組比值=(對照組 F-背景 F)/(對照組 R-背景 R),實驗組比值=(實驗組 F-背景 F/(實驗組 R-背景 R)

 

表達倍數(shù)實驗組比值/對照組比值。

注意事項

1) 反應(yīng)溫度:酶促反應(yīng)對溫度較為敏感,加樣檢測前務(wù)必將檢測試劑以及細(xì)胞培養(yǎng)液平衡至室溫20-25

   (2) 檢測儀器:能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用,但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同,測得的光信號值也會不同。 檢測板:為防止孔間干擾,推薦使用不透光酶標(biāo)板。

3) 發(fā)光信號會受到檢測環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響,應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測條件一致。

4) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套。

    (5) 本產(chǎn)品僅作科研用途!


上海起發(fā)實驗試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮(zhèn)川沙路6619號上海起發(fā)實驗試劑有限公司
郵箱:xs1@78bio.com
傳真:021-50724961
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
主站蜘蛛池模板: 成人高清av在线 | 在线a视频免费观看 | 亚洲乱码中文字幕综合 | 九色福利视频 | 久精品视频在线观看 | 欧美精品在线观看免费 | 久久久精品欧美一区二区免费 | av网站在线观看免费 | 久草电影免费在线观看 | 亚洲人成网站精品片在线观看 | 在线天堂日本 | 亚洲精品免费视频 | 久久精选视频 | 97超碰中文 | 国产丝袜 | 91精品影视 | 91少妇精拍在线播放 | 久久视频这里只有精品 | 亚洲欧美日韩国产一区二区 | 久久精品7| 91系列在线观看 | 最新国产精品拍自在线播放 | 玖玖在线观看视频 | 国产亚洲精品女人久久久久久 | 午夜性盈盈 | 国产精品乱码高清在线看 | 国精产品999国精产 久久久久 | 夜夜爽天天爽 | 久久艹99| 久久av网址 | 最新国产视频 | 欧美午夜性生活 | 天天狠狠干 | 亚洲视频在线观看网站 | 久久1电影院 | 91精品一区国产高清在线gif | 日日夜夜爱 | 国产精品久久久久久a | 爱爱av网| 久久手机免费视频 | 亚洲精品午夜国产va久久成人 | av大片免费看| 四虎4hu永久免费 | 国产视频在线一区二区 | 黄色毛片在线看 | 国产欧美中文字幕 | 欧美一级爽 | 久久综合九色综合久99 | 爱干视频 | 国产丝袜一区二区三区 | 国产精品美女久久久久久2018 | 日本xxxxav| 精品亚洲欧美一区 | 亚洲a在线观看 | 日本视频高清 | 在线观看国产区 | 精品高清美女精品国产区 | 久久久久久久久久久久久久免费看 | 五月在线视频 | 欧美 日韩 视频 | 三级视频日韩 | 成人在线黄色电影 | 91视频免费看网站 | 国产拍揄自揄精品视频麻豆 | 久久久久久久久久国产精品 | 玖玖综合网 | 国产无套精品久久久久久 | av在线h| 日韩深夜在线观看 | 国产97色在线 | 国产精品原创 | 久久久私人影院 | 色婷婷综合久久久中文字幕 | 中文字幕视频在线播放 | 精品在线视频播放 | 99国产一区 | 国产一级片免费视频 | 99精品国产一区二区 | 尤物97国产精品久久精品国产 | 色噜噜色噜噜 | 天堂av免费 | 九色在线| 欧美爽爽爽 | 国产一区私人高清影院 | 日本天天色 | 色综合天天色综合 | 久久香蕉影视 | 91亚洲精品国产 | 波多野结衣精品在线 | 欧洲精品码一区二区三区免费看 | 亚洲黄色免费在线看 | 亚洲综合情 | 91亚瑟视频 | 亚洲精品久久久久久久蜜桃 | 天天弄天天操 | 麻豆系列在线观看 | 97超碰在线免费 | 黄色com| 999久久国产精品免费观看网站 | 国产精品6999成人免费视频 | 亚洲a成人v | 国产一级在线免费观看 | 久久久精品成人 | 久久久久久蜜桃一区二区 | 波多野结衣视频一区 | 午夜电影久久久 | 综合久久婷婷 | 亚洲免费av片 | 波多野结衣视频一区 | 久久理论影院 | 视频一区二区免费 | 激情久久久| 四虎国产精品成人免费影视 | 伊人六月 | 日日夜夜网站 | 国产色a在线观看 | 久久精品草| 国产精品亚洲视频 | 国内精品视频免费 | 久久久久久久久久久福利 | 国产在线观看国语版免费 | 99精品偷拍视频一区二区三区 | 97涩涩视频 | 国产精品一区二区你懂的 | 亚洲日本色 | 夜夜躁日日躁 | 91在线操 | 久久一区国产 | 久久精品香蕉视频 | 97在线视频网站 | 欧美乱码精品一区二区 | 久久国产精品久久久久 | 天天色棕合合合合合合 | 狠狠干电影 | 日本公妇色中文字幕 | 亚洲成av人片 | 国产高清不卡在线 | 粉嫩av一区二区三区四区 | 91高清不卡 | 久久99亚洲精品久久久久 | 在线岛国av | 成年人免费在线看 | 天天射天天射天天射 | 9在线观看免费高清完整 | 久久伊人八月婷婷综合激情 | 激情欧美一区二区免费视频 | 亚洲高清视频在线观看 | 国产视频导航 | 久久久国产精华液 | 久久久男人的天堂 | 国产精品久久久久久69 | 欧美日韩国产精品一区二区三区 | 日韩av中文字幕在线免费观看 | 99在线热播 | 夜夜嗨av色一区二区不卡 | 国产一区黄色 | 麻豆视频免费观看 | 日日弄天天弄美女bbbb | 人人天天夜夜 | 色网影音先锋 | 美女视频永久黄网站免费观看国产 | 久久精品99国产 | 日韩欧美精品一区二区 | 日韩电影在线观看一区二区 | 免费在线看v | 日本黄网站 | 视频二区在线 | 日韩二区三区 | 国产午夜激情视频 | 91av在线免费观看 | 亚洲精品网址在线观看 | 四虎精品成人免费网站 | 97小视频 | 日日干天天操 | 国产免费精彩视频 | 国产专区日韩专区 | 黄色毛片网站在线观看 | 国产黄色片免费观看 | 久久久久久久久网站 | 久久久国产精品麻豆 | 国产日韩精品一区二区在线观看播放 | 99精品视频在线观看视频 | 三级av免费 | sm免费xx网站 | 女人18毛片a级毛片一区二区 | 日韩欧美高清视频在线观看 | 五月婷在线观看 | 91久久奴性调教 | 国产1级视频 | 狠狠色丁香九九婷婷综合五月 | 国产小视频在线免费观看 | 成人免费在线观看电影 | 成人在线视频论坛 | 色小说在线 | 99精品国产在热久久下载 | 99久e精品热线免费 99国产精品久久久久久久久久 | 亚州成人av在线 | 欧美日韩视频在线播放 | 一区二区不卡在线观看 | 91精品视频一区二区三区 | 日韩av在线资源 | 久久视频精品在线观看 | 黄污网 | 五月婷婷激情 | 五月婷婷播播 | 日韩综合第一页 | 99精品欧美一区二区三区黑人哦 | 久久久久免费精品 | 国产福利91精品张津瑜 | 久久久国产精品麻豆 | 国产黄色精品网站 | 高清不卡免费视频 | 色在线网 | 99精品在这里 | 久久久久久国产精品亚洲78 | 又黄又刺激又爽的视频 | 天天躁日日躁狠狠躁av麻豆 | 久久一区二区免费视频 | 成人免费视频视频在线观看 免费 | 亚洲日本在线一区 | 日韩黄色中文字幕 | 国产999精品久久久久久 | 天天夜夜狠狠操 | 日韩精品一区二区三区水蜜桃 | a'aaa级片在线观看 | 亚洲欧美精品一区 | 91最新网址 | 韩国三级av在线 | 国产美女视频 | 国产成人一区二区三区影院在线 | 国产精品人成电影在线观看 | 日韩免费一区二区三区 | 偷拍精偷拍精品欧洲亚洲网站 | 国产亚洲婷婷免费 | 在线探花 | 亚洲精品美女久久久久 | 男女日麻批| 精品国产一区二区三区久久久 | 久久久久久久久免费视频 | 激情欧美丁香 | 国产欧美日韩一区 | 亚洲精品国产品国语在线 | www黄免费| 黄色片网站 | 狠狠夜夜 | 奇米影视在线99精品 | a天堂最新版中文在线地址 久久99久久精品国产 | 91福利专区| 香蕉国产91| 成人四虎 | 日韩在线网 | 麻豆国产精品va在线观看不卡 | 欧美 日韩精品 | 国产精品一区专区欧美日韩 | 国产成人免费在线 | 国产网站av | 亚洲成人精品久久 | 久久综合激情 | 黄色大片视频网站 | 日韩在线观看三区 | 国产一卡二卡四卡国 | 国外av在线| 久久精品99国产 | www日日| 国产精品久久久久久久久久不蜜月 | 探花视频在线观看+在线播放 | 亚洲女在线 | 久草热视频| 九九九九九九精品任你躁 | 97成人在线观看视频 | 99精品免费久久久久久久久 | 国产成人精品一区二区三区在线 | 九九免费在线观看 | 午夜黄色大片 | 一区二区三区 中文字幕 | 97福利社| 亚洲男模gay裸体gay | 欧美日韩在线第一页 | 亚洲综合激情小说 | 久艹视频在线免费观看 | 最近中文字幕免费大全 | 美女精品 | 中文字幕在线观看的网站 | 成人黄性视频 | 97成人免费视频 | 日韩一区正在播放 | 免费高清看电视网站 | 久热av | 色久av| 五月丁色| 久久精品站 | 二区三区精品 | 免费久久久久久久 | 日本中文字幕在线视频 | 婷婷成人综合 | 探花视频免费观看高清视频 | 岛国av在线不卡 | 超碰97在线人人 | 欧美午夜a | 波多野结衣视频一区二区三区 | 色狠狠婷婷 | 久草久视频 | 操少妇视频 | 操操操操网 | 久久久国产电影 | 国产精品一区二区精品视频免费看 | 国产91精品看黄网站在线观看动漫 | 最近的中文字幕大全免费版 | av中文字幕网址 | 免费亚洲婷婷 | 色吊丝在线永久观看最新版本 | 97精品在线视频 | 中文字幕有码在线观看 | 国产亚洲人成网站在线观看 | 欧美久久久久 | 亚洲精品免费观看视频 | 国产美女精品在线 | www久久com | 国产精品v欧美精品v日韩 | 韩国三级一区 | 97国产精品亚洲精品 | 成人毛片一区二区三区 | 91九色成人蝌蚪首页 | 亚洲精品国精品久久99热 | 日日干激情五月 | 亚洲日本色 | 国产成人精品一区一区一区 | 区一区二区三区中文字幕 | 日本在线观看一区二区三区 | 黄在线| 国产精品一二 | 国产亲近乱来精品 | 69亚洲视频 | 中国黄色一级大片 | 欧美一级电影免费观看 | 国产精品 视频 | 成人在线观看资源 | 久久久99国产精品免费 | 亚洲爱视频 | 天天爱天天 | 精品国产伦一区二区三区观看说明 | 久久午夜色播影院免费高清 | 亚洲精品国产精品国自产 | 亚洲aⅴ免费在线观看 | 国产精品国产三级国产不产一地 | 日韩欧美高清一区二区 | 97成人在线 | 久久中文网 | 午夜精品99久久免费 | 免费精品视频在线观看 | 99精品视频在线免费观看 | 国产精品久久久久久久久久直播 | 久久精品成人欧美大片古装 | 欧美激情综合五月色丁香 | 干干日日| www.色午夜| 久久精品4 | 亚洲精品小视频 | 日韩在线观看视频在线 | 婷婷电影在线观看 | 久久国产精品第一页 | 日韩午夜视频在线观看 | 69国产精品视频免费观看 | 日韩免费一级电影 | 97视频总站 | 四虎影视成人永久免费观看亚洲欧美 | 日本99热| 在线看国产日韩 | 最新婷婷色 | 少妇bbw撒尿| 在线观看视频你懂的 | 久久精品国产亚洲 | 国产精品99页 | av在线播放快速免费阴 | 久久蜜臀一区二区三区av | 色综合 久久精品 | 国产精品免费久久久久影院仙踪林 | 欧美二区视频 | 日韩专区在线播放 | 久久久免费精品 | 久久久久网站 | 九九九九九九精品任你躁 | 97超碰人人| 黄色91免费观看 | 99精品色 | www免费看 | 国产高清不卡av | 亚洲黄网站 | 欧美a级一区二区 | 日韩最新av | 91免费观看视频网站 | 视频国产区 | 久久久国产成人 | 综合网伊人 | 99精品视频一区二区 | 日韩精品免费在线观看 | 天天插狠狠干 | 久久精品一区二区三区视频 | 亚洲精品字幕在线观看 | 国产精品黑丝在线观看 | 日韩天天综合 | 97视频在线| 国产精品久久久久婷婷二区次 | 精品中文字幕在线播放 | www.婷婷com | 黄av免费| 国产第一页福利影院 | 色婷婷影视 | 亚洲精品国精品久久99热一 | 欧美日韩aa | 亚洲精品啊啊啊 | 91看国产| 久久资源总站 | 激情久久伊人 | 久久线视频 | 国产精品乱码在线 | 国产成a人亚洲精v品在线观看 | 国产特级毛片aaaaaaa高清 | 在线播放亚洲激情 | 日韩免费一区二区三区 | 久草视频首页 | 天天天天天天天操 | 三级视频国产 | 在线中文字幕网站 | 一级性视频 | 国产精品视频专区 | 成人wwwxxx视频| 黄色片网站大全 | 激情五月婷婷综合 | 欧美一级大片在线观看 | 男女精品久久 | 在线观看国产一区 | av官网 | 精品国产伦一区二区三区观看方式 | 免费人人干| 国际av在线 | 三级在线视频观看 | 综合网欧美 | av资源免费看 | 午夜精品剧场 | 亚洲视频免费在线观看 | 亚洲在线色 | 亚洲经典视频在线观看 | 婷婷www | 少妇性色午夜淫片aaaze | 最新av在线网站 | 久久久精品国产一区二区三区 | 天天操天天色天天射 | 97视频在线观看播放 | 99精品国产一区二区三区麻豆 | 日韩区欧美久久久无人区 | 国产精品九九视频 | 国产精品欧美日韩 | 久久精品一二区 | 在线中文字幕电影 | 久久99最新地址 | 日韩电影久久久 | 日本中文字幕在线视频 | 国产老太婆免费交性大片 | 国产精品黄色 | 伊人色**天天综合婷婷 | 色九九影院 | 国产精品一区二区三区四区在线观看 | 四虎免费在线观看视频 | 国产精品99蜜臀久久不卡二区 | 福利电影一区二区 | 成人a免费 | 免费亚洲成人 | 91亚洲精品久久久蜜桃 | 91资源在线 | 亚洲国产一二三 | av在线影片 | av电影不卡在线 | 国产精品久久久一区二区 | 国产成人免费精品 | 麻豆视频观看 | 久久污视频 | 中文字幕精品一区二区三区电影 | 国内免费的中文字幕 | 日韩一区在线免费观看 | 成人超碰在线 | 日韩精品专区在线影院重磅 | 亚洲精品一区二区三区新线路 | 国产日韩欧美在线看 | 国产精品中文久久久久久久 | 亚洲视频 中文字幕 | 久久夜色精品国产亚洲aⅴ 91chinesexxx | 在线免费观看的av网站 | 在线观看视频一区二区 | 精品国产一二区 | 久草成人在线 | 国产自在线 | 另类老妇性bbwbbw高清 | a视频免费 | 最新精品视频在线 | 久久久久久欧美二区电影网 | 91激情小视频 | 韩日成人av | 99精品系列 | 天天操天天拍 |