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支原體基因組DNA提取試劑盒(離心柱法)說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-04-12      點(diǎn)擊次數(shù):2541

支原體基因組DNA提取試劑盒(離心柱法)說(shuō)明書(shū)

上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí),把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè),圓夢(mèng)中國(guó)。

產(chǎn)品詳情

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

78EA10019-50T

50T

1200.00

產(chǎn)品描述

《支原體基因組 DNA 提取試劑盒》(離心柱法)(Mycoplasma Genomic DNA Extraction Kit with Columns)的操作方法和試劑配方已經(jīng)針對(duì)支原體的特點(diǎn)做了優(yōu)化,專門(mén)用于從體外培養(yǎng)的細(xì)胞、細(xì)胞上 清、血清、血漿、全血、生物制品等樣品中提取支原體基因組 DNA。提取的支原體基因組 DNA 可用于《一 步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》、《PCR 法支原體檢測(cè)試劑盒》和《探針?lè)ㄖгw檢測(cè)試劑盒》。

支原體基因組 DNA 的提取有兩個(gè)作用:

1)可以去除所有可能抑制 PCR 擴(kuò)增的成分或者干擾《一步法 恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》顯色的成分,保證后續(xù) PCR 擴(kuò)增的正常進(jìn)行或者《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》 的顯色不被干擾;

2)具有濃縮支原體 DNA 的作用,可以提高相對(duì)檢測(cè)靈敏度 10-100 倍。

產(chǎn)品組分

蛋白酶 K 溶液:Proteinase K(20 mg/mL) 1 mL

溶液 GR:Buffer GR 15 mL

溶液 GL:Buffer GL 15 mL

清洗液 GW1:Buffer GW1(Concentrate) 13 mL

清洗液 GW2:Buffer GW2(Concentrate) 15 mL

洗脫液 EB:Elution Buffer EB 15 mL

吸附柱:Spin Columns DM 50 個(gè)

收集管:Collection Tube 50 個(gè)

使用方法

使用方法

1.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1) Buffer GW1 和 Buffer GW2 的配制:第一次使用前,應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明先在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入無(wú)水乙醇,并在試劑瓶標(biāo)簽中做好標(biāo)記。

2) 使用前請(qǐng)檢查 Buffer GL 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀,請(qǐng)將 Buffer GL 于 56?C 水 浴孵育重新溶解。

2. 樣品處理:本試劑盒優(yōu)選體外培養(yǎng)的細(xì)胞上清(貼壁細(xì)胞直接取細(xì)胞培養(yǎng)上清、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞取低速 離心后的離心上清)、血清、血漿、溶液型生物制品作為提取支原體基因組 DNA 的樣品。如果是粉末 型樣品,需用水溶解后,再進(jìn)行后續(xù)操作。

1:體外培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)上清或懸浮細(xì)胞,經(jīng) 1200 rpm(約 150 g)低速離心 5 分鐘后(切 記:此步驟離心力不能太大,否則支原體會(huì)被離心去除了!),取離心后上清進(jìn)行檢測(cè)。

2:如果初始樣品是加了抗凝劑的全血,經(jīng) 1200 rpm(約 150 g)低速離心 10 分鐘后(切記: 此步驟離心力不能太大,否則支原體會(huì)被離心去除了!),取上層血漿進(jìn)行檢測(cè)。

3:如果初始樣品是未加抗凝劑的全血,待血液凝固后,取血清進(jìn)行檢測(cè)。

3. 取上述細(xì)胞上清、血清、血漿、生物制品等樣品 200 μL,用移液槍吹吸均勻后,進(jìn)行后續(xù)操作。

1:當(dāng)樣品量小于 200 μL 時(shí),加入 Buffer GR 補(bǔ)足至 200 μl,再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

2:如果預(yù)期待測(cè)樣品支原體含量較少(比如長(zhǎng)期低溫保存的血清、血漿、胰酶、生物制品等), 可以取上述樣品 1 mL,加入 1.5 mL 離心管內(nèi),13000 rpm(約 16000 g)高速離心 5 分鐘。吸走 離心后的上清 800 μL,剩余 200 μL 用移液槍吹吸均勻后,進(jìn)行后續(xù)操作。此步驟起濃縮支原體的 作用,從而提高支原體檢測(cè)的相對(duì)靈敏度。如果需要,上述樣品的體積可以進(jìn)一步放大,經(jīng)過(guò)多 次高速離心后,剩余 200 μL 用于后續(xù)操作(比如,如果初始體積是 5 mL,經(jīng) 5 次高速離心,取剩 余的 200 μL 進(jìn)行后續(xù)操作,最終用 50 μL 洗脫液進(jìn)行洗脫,則支原體 DNA 大約濃縮了 100 倍,支 原體檢測(cè)的相對(duì)靈敏度也大約提高了 100 倍。)

4. 向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K(20 mg/mL)溶液,混勻。

5. 加入 200 μL Buffer GL(如果室溫較低,使用前請(qǐng)檢查 Buffer GL 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶 或者沉淀,請(qǐng)將 Buffer GL 于 56?C 水浴孵育重新溶解),用吸頭充分吹吸均勻或用 Vortex 充分震蕩。

注意:不要將 Proteinase K 和 Buffer GL 進(jìn)行預(yù)混,否則 Proteinase K 可能失活。

6. 將離心管放置 56?C 水浴,孵育 15 分鐘。

注意:此步驟不能省略!

7. 加入 2 μL 支原體 qPCR 內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2(注意:內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2 請(qǐng)吹吸均勻后,再加入。內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2 只在本公司《探針?lè)ㄖгw檢測(cè)試劑盒》內(nèi)含有,如果使用其他支原體檢測(cè)方法,本步驟可以 跳過(guò)!)。

1:此步驟只有使用本公司《探針?lè)ㄖгw檢測(cè)試劑盒》時(shí),需要加入支原體 qPCR 內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2。

2:加入的內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2 用于監(jiān)控支原體 DNA 的提取和后續(xù)支原體 qPCR 的擴(kuò)增是否有效。

8. 加入 200 μL 無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻數(shù)次。 l 注意:此處不能高速離心!如果需要(一般不需要離心),只能 1000 rpm(約 100 g)低速短暫 離心(20 Sec),使管壁和壁蓋上的液體集中到管底。

9. 用 1 mL 吸頭將所得溶液全部(含管壁和蓋子上溶液)加入到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns DM) 中。12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

10.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇!),蓋上蓋子,將吸附柱快速顛倒 一次(目的:清洗管壁和蓋子中的雜質(zhì)),12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱 重新放回收集管中。

11.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇!),蓋上蓋子,將吸附柱快速顛 倒一次(目的:清洗管壁和蓋子中的雜質(zhì)),12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附 柱重新放回收集管中。

12.再次清洗:向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇!),蓋上蓋子,將吸附柱快速顛倒一次(目的:清洗管壁和蓋子中的雜質(zhì)),12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢 液,將吸附柱重新放回收集管中。

13.繼續(xù) 12,000 rpm 離心 2 分鐘。離心后,在亮光下,仔細(xì)檢查吸附柱內(nèi)部吸附膜上方的塑料墊圈四周是 否有液體殘留。如果發(fā)現(xiàn)吸附柱內(nèi)部塑料墊圈四周有液體殘留,可以將吸附柱放回收集管內(nèi),將有液 體殘留的一側(cè)放在離心力內(nèi)側(cè),繼續(xù) 12,000 rpm 離心 1 分鐘。

14.離心后,經(jīng)仔細(xì)檢查,如果確認(rèn)吸附柱內(nèi)部塑料墊圈四周沒(méi)有液體殘留,則可以丟棄收集管,將吸附柱 置于一個(gè)新的 1.5 mL 離心管(自備)中,打開(kāi)吸附柱蓋子,置于 50-65℃的烘箱內(nèi)放置至少 15 分鐘, 以讓吸附膜中的乙醇揮發(fā)干凈(請(qǐng)務(wù)必放在 50-65℃的烘箱內(nèi)放置!如果室溫放置,不僅時(shí)間需要 延長(zhǎng),還不排除有些樣品由于乙醇揮發(fā)不干凈,影響后續(xù) PCR 擴(kuò)增效率,甚至失敗)。

注意:打開(kāi)吸附柱蓋子,將吸附柱放在 50-65℃的烘箱內(nèi)至少 15 分鐘,此步驟非常關(guān)鍵!如果沒(méi) 有烘箱,強(qiáng)烈建議購(gòu)買(mǎi)一個(gè)。這一步的目的是將吸附膜中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)嚴(yán) 重影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(如:酶切、PCR 擴(kuò)增等),甚至可能導(dǎo)致后續(xù)的 PCR 失敗。

15.向吸附柱的中間部位懸空加入 50 μL Elution Buffer EB,室溫放置 3 分鐘,12,000 rpm 離心 1 分鐘, 收集 DNA 溶液,-20℃保存。

運(yùn)輸及保存方法

該產(chǎn)品常溫運(yùn)輸,室溫保存(收貨后,其中的 Proteinase K 放-20?C 保存)。該條件下,至少 3 年內(nèi)有 效。Proteinase K 溶液可以在室溫保存 2-3 個(gè)月,長(zhǎng)期保存需要放-20?C。


上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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