glenresearch  60-5000-96說明書

Quenching buffer for Glen-Pak™ purification reagent RNA purification

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1000mL Nalgene

250mL Nalgene

Glen Pak的原則™ DNA/RNA純化

與Poly Pak一樣™ 墨盒，Glen Pak™ 盒利用保留在寡核苷酸上的5’DMT將全長序列特異性結合到支持物上。在純化過程中，故障序列被消除，DMT隨后被去除，從而允許純化產物的洗脫。

與傳統固相相比，Glen-Pak凈化系統有許多優點

萃取（SPE）系統。

多才多藝

直接純化寡核苷酸，無需任何預純化干燥步驟，來源：

? 氫氧化銨

? AMA（氫氧化銨/40%甲胺水溶液1:1）

? 叔丁胺/水1:3（v/v）（1）

? 甲醇中的50mM碳酸鉀（2）

? 甲醇/水中0.4M*4:1（v/v）（3）

使用適用于手持式注射器、真空歧管或高通量96孔板的筒。

（1） 加載前，用100 mg/mL氯化鈉1:7（v/v）稀釋叔丁胺/水溶液。

（2） 稀釋50mM鉀

Purification of DNA Oligonucleotides (DMT-ON)

Materials                                                                                                                                       Amount Used

Glen-Pak DNA Purification Cartridge (60-5100-XX, 60-5200-XX)                                                      1

Vacuum manifold (96 well or 12-24 port SPE type, if appropriate)                                                    1

HPLC Grade Acetonitrile                                                                                                                0.5mL

2.0M Acetate (60-4110-XX, TEAA, pH7)                                                                    1mL

100 mg/mL Sodium Chloride                                                                                                            1mL

Salt Wash Solution (5% Acetonitrile in 100mg/mL Sodium Chloride)                                              2mL

2% Trifluoroacetic Acid (TFA)/Water (60-4040-57)                                                                            2mL

Deionized Water 2mL50% Acetonitrile/Water containing 0.5% ammonium hydroxide*                   1mL

程序

樣品制備

1.DNA合成后，在1mL氫氧化銨或氫氧化銨/甲胺（AMA）中正常脫保護DMT-ON寡核苷酸。不需要冷凍干燥脫保護溶液。為了使該程序成功，合成必須進行DMT-ON。堿不穩定的保護基團必須用AMA或氫氧化銨（1.0mL）去除。

2.向脫保護的DMT-ON寡核苷酸中加入1mL 100 mg/mL氯化鈉溶液，最終體積為2mL。樣品的最終鹽濃度必須在50 mg/mL左右，以便在試劑盒上裝載寡聚物。可能會加載更大的卷，但這是我們建議在盒帶上加載的卷。

墨盒準備

3.將所需數量的150 mg藥筒放入輸出導向器下方機架中的歧管和收集管（如果需要）的陰魯爾端口中。我們通常使用12端口歧管。

4.打開真空，使用真空控制閥將壓力調節至~7mm Hg。（如果歧管上沒有可用的控制閥，則將流速設定為每秒1-2滴左右）。使用0.5mL乙腈和1mL 2M TEAA對濾筒進行處理。

乙腈沖洗樹脂上的有機殘留物并將其潤濕，而TEAA作為離子配對試劑來增強DMT-ON寡核苷酸與樹脂的結合。

凈化程序

5.將低聚/鹽混合物以1mL等分試樣的形式涂抹在試劑盒上（收集洗脫液并保存，以防裝載失敗或錯誤）。在裝載過程中，DMT-ON寡聚物傾向于粘附在卡盤填料上，而大多數故障序列沒有保留下來。

6.用2 x 1mL的鹽洗液清洗濾筒。這將清除盒帶中剩余的故障序列。

7.用2 x 1mL的2%TFA沖洗濾筒。拆卸DMT時，可能會看到微弱的橙色條帶