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有關(guān)血清的常見(jiàn)問(wèn)題

更新時(shí)間:2016-06-23      點(diǎn)擊次數(shù):3091

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。因此,我們特別整理了一些實(shí)驗(yàn)室里常會(huì)遇到的問(wèn)題,供大家參考:

1. 保存血清的方法?

我們建議血清應(yīng)保存在-5-2O。然而,若存放于4時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

2. 如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于28冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

4. 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

5. 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn),常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái),不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!

6. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?

胎牛血清沒(méi)有預(yù)老化,儲(chǔ)存在28時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在-20儲(chǔ)存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。

7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

我們建議您在使用血清的時(shí)候,注意下列的操作:

1

解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-204至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(-2037),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

2

解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

3

請(qǐng)勿將血清置于37太久。若在37放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

4

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。

5

若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守5630分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

 

8. Qualified Certified 胎牛血清 有什么差別?

Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清執(zhí)行的所有的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)程序,,除了這些標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè),Certified胎牛血清還有一些附加的檢測(cè):

        zui終內(nèi)毒素含量的檢測(cè)
        噬菌體檢驗(yàn)
        生物化學(xué)檢測(cè)
        激素的檢測(cè)
        血紅蛋白檢測(cè)
        Sf9 細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)及方法學(xué)檢測(cè)

9. 如何評(píng)估ES細(xì)胞合格的胎牛血清?

使用D3 ES細(xì)胞。這是一個(gè)對(duì)于胎牛血清中生長(zhǎng)促進(jìn)、生長(zhǎng)抑制和分化因子非常敏感的細(xì)胞系。

相關(guān)生長(zhǎng)效率分析:

當(dāng)ES細(xì)胞以非常低的密度傳入包含10%胎牛血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,檢測(cè)啟動(dòng)和支持ES細(xì)胞克隆的能力。

細(xì)胞毒分析:

當(dāng)以非常低的密度傳入包含30%胎牛血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,檢測(cè)ES細(xì)胞和feeder細(xì)胞的生長(zhǎng)能力。

相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析:

檢測(cè)胎牛血清支持未分化ES細(xì)胞克隆的能力。通過(guò)堿性磷酸酶活性評(píng)估分化程度。未分化的ES細(xì)胞小顏色深紅粉紅,分化的細(xì)胞較大,豐滿,顏色較淺。

所有的分析在沒(méi)有ESGRO的情況下進(jìn)行,培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會(huì)掩蓋由胎牛血清所導(dǎo)致的問(wèn)題。(ESGROLIF經(jīng)常用來(lái)保持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)。)

培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)大約8批血清中有1批可以用來(lái)培養(yǎng)ES細(xì)胞

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